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IVD檢測(cè)之痛,BSA雜質(zhì)殘留替代方案——植物源重組人血清白蛋白“禾優(yōu)?OsrHSA”
來源:禾元生物| 發(fā)布時(shí)間:2023-04-04| 點(diǎn)擊量:2627


在體外診斷(In Vitro Diagnosis,IVD)行業(yè)中,BSA(Bovine serum albumin)牛血清白蛋白一直是廣泛使用的原材料之一。在各大診斷方法,比如生化、化學(xué)發(fā)光、質(zhì)譜等檢測(cè)方法中發(fā)揮重要的作用。但BSA主要是通過牛血漿提取,血清中殘留的IgG、蛋白酶、激素、脂肪酸等物質(zhì),即使經(jīng)過相關(guān)提純工藝,仍然會(huì)有微量的殘留,在一些血液樣本,尤其是微量樣本檢測(cè)時(shí),可能會(huì)對(duì)結(jié)果產(chǎn)生干擾,成為了IVD檢測(cè)的一大痛點(diǎn)。
禾優(yōu)??OsrHSA,專為IVD檢測(cè)而生,是一種來源于水稻胚乳細(xì)胞的重組人血清白蛋白OsrHSA,由于植物源的生產(chǎn)方式,同時(shí)經(jīng)過嚴(yán)格的提取和純化后,不含有上述干擾物質(zhì),經(jīng)內(nèi)部自測(cè)和客戶反饋,禾優(yōu)?OsrHSA可以勝任BSA在IVD行業(yè)的相關(guān)應(yīng)用,如保護(hù)劑,封閉劑,緩沖液,血漿基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品配制等。

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一、什么是禾優(yōu)?OsrHSA?

禾優(yōu)?OsrHSA,是武漢禾元生物科技股份有限公司自主研發(fā)、生產(chǎn)的一款植物源重組人血清白蛋白,相比BSA,是利用生物工程技術(shù)重組表達(dá),不源自動(dòng)物血清提取,具有純度高,批間差高度一致性等特點(diǎn),在中國(guó)對(duì)HSA需求量日益增大的今天,禾優(yōu)?OsrHSA無疑是IVD行業(yè)的澎湃動(dòng)力! ??
另外,與傳統(tǒng)的人血清白蛋白提取不同,禾優(yōu)?OsrHSA基因工程水稻胚乳細(xì)胞表達(dá)后收集純化而來整個(gè)過程從根源上解決了血液源成分的殘留,提高了產(chǎn)品整體純度,同時(shí),規(guī)模化的種植—采收—純化生產(chǎn)工藝流程圖1使得禾優(yōu)?OsrHSA具有高度一致的批間重復(fù)性,克服了不同批次需多次測(cè)試的弊端,同時(shí)也規(guī)避了微生物重組蛋白發(fā)酵液批間不穩(wěn)定,雜質(zhì)多的問題。更好的匹配規(guī)?;a(chǎn)使用。

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圖1 禾優(yōu)?OsrHSA整體生產(chǎn)流程示意圖
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二、禾優(yōu)?OsrHSA產(chǎn)品功能檢測(cè)展示及使用反饋
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1. 使用場(chǎng)景:作為蛋白定量的標(biāo)準(zhǔn)品

HSA同BSA一樣,可廣泛應(yīng)用于蛋白質(zhì)的定量檢測(cè),特別是臨床血液、體液,臨床化學(xué)等領(lǐng)域有較多應(yīng)用。禾優(yōu)?? ?OsrHSA參考商業(yè)化的BSA標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋方法稀釋后,采用商業(yè)化的Bradford(Thermo Fisher)和BCA(Thermo Fisher)檢測(cè)試劑盒進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制,結(jié)果如圖2和圖3所示,禾優(yōu)?OsrHSA同BSA一樣,擬合出的標(biāo)準(zhǔn)曲線線性R2均大于0.99,經(jīng)準(zhǔn)確標(biāo)定后可在體外診斷領(lǐng)域中作為蛋白質(zhì)定量標(biāo)準(zhǔn)品。

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2. 使用場(chǎng)景:作為酶、酶標(biāo)抗體、抗原、細(xì)胞因子等的穩(wěn)定劑

體外診斷檢測(cè)試劑,如酶、酶標(biāo)記的抗體、標(biāo)準(zhǔn)抗原等生物活性物質(zhì),在存儲(chǔ)過程中會(huì)受到溫度、pH、離子濃度、光照、酶、濕度等因素的影響,嚴(yán)重影響到試劑的穩(wěn)定性。白蛋白作為血漿中含量最豐富的蛋白,心形的蛋白結(jié)構(gòu)中,有17對(duì)二硫鍵,1個(gè)游離半胱氨酸,能夠結(jié)合多種物質(zhì),是血漿中非常重要的物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)載體,同時(shí)具有親水疏水作用力,作為保護(hù)劑,加強(qiáng)與蛋白質(zhì)的疏水作用,抵抗熱變性,穩(wěn)定蛋白結(jié)構(gòu)。

測(cè)試?yán)?:OsrHSA與牛血清白蛋白對(duì)酶標(biāo)抗體的保護(hù)對(duì)比
測(cè)試結(jié)果:

結(jié)論:禾優(yōu)?OsrHSA作為穩(wěn)定劑,在37℃下對(duì)酶標(biāo)抗體的保護(hù)效果明顯優(yōu)于牛血清(圖4),且在37℃測(cè)試條件下酶促反應(yīng)的信號(hào)值相對(duì)于4℃相對(duì)變化率在10%以內(nèi),穩(wěn)定性較好(圖5)。

測(cè)試?yán)?:禾優(yōu)?OsrHSA與BSA對(duì)肌酸激酶的保護(hù)效果
測(cè)試結(jié)果:

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圖6 禾優(yōu)?OsrHSA與BSA對(duì)肌酸激酶的保護(hù)效果

結(jié)論:放置不同時(shí)間后,加入禾優(yōu)?OsrHSA作為穩(wěn)定劑,不同溫度下肌酸激酶的T/C(Test值/Control值的比值)信號(hào)比值均高于BSA,表明其穩(wěn)定性較好(圖6),且保護(hù)效果不隨肌酸激酶的濃度發(fā)生變化。

測(cè)試?yán)?:禾優(yōu)?OsrHSA與BSA對(duì)不同PCT(降鈣素原)磁珠的保護(hù)效果對(duì)比
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圖7?不同濃度的禾優(yōu)?OsrHSA與BSA對(duì)不同處理的降鈣素原(PCT)磁珠保護(hù)效果

結(jié)論:加入1% 禾優(yōu)?OsrHSA作為穩(wěn)定劑,37℃放置相對(duì)于4℃放置的信號(hào)衰減值明顯優(yōu)于BSA(圖7)。

測(cè)試?yán)?:禾優(yōu)?OsrHSA與BSA對(duì)OsrhbFGF(重組人堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子)的保護(hù)效果對(duì)比實(shí)驗(yàn)
測(cè)試結(jié)果:

圖8?禾優(yōu)?OsrHSA與BSA對(duì)OsrhbFGF活性的保護(hù)效果對(duì)比

結(jié)論:25℃放置不同天數(shù),禾優(yōu)?OsrHSA對(duì)OsrhbFGF活性保護(hù)效果均好于BSA(圖8)。
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3. 使用場(chǎng)景:作為酶、抗原、細(xì)胞因子等的稀釋劑和免疫檢測(cè)實(shí)驗(yàn)中的封閉劑

在臨床血液、體液,臨床化學(xué)等領(lǐng)域中,常用免疫診斷技術(shù)對(duì)目標(biāo)分子進(jìn)行定性或定量檢測(cè)。其中免疫層析,ELISA,化學(xué)發(fā)光,流式等檢測(cè)技術(shù),抗原或抗體等從高濃度稀釋至低濃度過程中,需要用惰性蛋白模擬生理環(huán)境保證其活性不受損失,分子構(gòu)象能夠維持長(zhǎng)時(shí)間的穩(wěn)定。抗原或抗體吸附在載體上后,需要用到惰性蛋白封閉未結(jié)合位點(diǎn),減少非特異性吸附,減少交叉反應(yīng),提高檢測(cè)方法的靈敏度。
測(cè)試?yán)?:禾優(yōu)?OsrHSA與BSA對(duì)人纖維連接蛋白ELISA檢測(cè)的封閉和稀釋效果對(duì)比
測(cè)試結(jié)果

圖9?不同濃度的禾優(yōu)?OsrHSA與BSA作為人纖維連接蛋白ELISA檢測(cè)的封閉劑和稀釋劑對(duì)比效果

結(jié)論:禾優(yōu)?OsrHSA可獲得與BSA相似的封閉效果,且0.5% OsrHSA即可獲得與1% BSA的封閉和稀釋效果(圖9。
測(cè)試?yán)?:禾優(yōu)?OsrHSA對(duì)不同處理的磁珠封閉實(shí)驗(yàn)
測(cè)試結(jié)果:

表1?重組人白蛋白對(duì)不同磁珠的封閉效果

備注:表中數(shù)據(jù)為熒光免疫檢測(cè)的信號(hào)讀值。

結(jié)論:禾優(yōu)?OsrHSA對(duì)不同處理的磁珠進(jìn)行封閉后,重復(fù)測(cè)定結(jié)果顯示其RSD(相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差)值均小于10%,封閉效果較好(表1)。
測(cè)試?yán)?:禾優(yōu)?OsrHSA與BSA對(duì)吖啶反應(yīng)試劑的稀釋穩(wěn)定對(duì)比
測(cè)試結(jié)果:

表2?OsrHSA與BSA對(duì)吖啶稀釋液配方穩(wěn)定性對(duì)比結(jié)果

結(jié)論:加入禾優(yōu)?OsrHSA的吖啶稀釋液穩(wěn)定性較好(表2)。

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4. 使用場(chǎng)景:作為血清基質(zhì)對(duì)照
在臨床檢驗(yàn)過程中,由于人體樣本來源復(fù)雜,受干擾影響較大,簡(jiǎn)單的光譜法容易受到樣本本身成分顏色的干擾,往往給出假陽性或假陰性的結(jié)果,難以實(shí)現(xiàn)臨床應(yīng)用中快速、準(zhǔn)確、特異性地檢測(cè)類固醇、維生素等小分子化合物。
測(cè)試?yán)簩?duì)禾優(yōu)?OsrHSA制備的血清基質(zhì)進(jìn)行高效液相色譜串質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)雜質(zhì)測(cè)定
測(cè)試結(jié)果:
表3?禾優(yōu)?OsrHSA類固醇含量檢測(cè)

結(jié)論:經(jīng)檢測(cè),禾優(yōu)?OsrHSA不含有類固醇等物質(zhì)(表3),禾優(yōu)?OsrHSA作為血清基質(zhì)對(duì)照干擾小,可保證準(zhǔn)確性和特異性。

結(jié)語
禾優(yōu)?OsrHSA作為禾元生物的拳頭產(chǎn)品,劍指IVD原輔料市場(chǎng),經(jīng)過全方位多次測(cè)試,證明重組植物源人血清白蛋白禾優(yōu)?OsrHSA因其純度高,無人源動(dòng)物源物質(zhì),單批次產(chǎn)量大,批間差小的特點(diǎn),其作為封閉劑、保護(hù)劑、穩(wěn)定劑和各類試劑盒的白蛋白標(biāo)準(zhǔn)品、血清基質(zhì)時(shí)完全擁有常見BSA或牛血清相同或更優(yōu)的功能,產(chǎn)品也獲得了多家客戶的積極評(píng)價(jià)和續(xù)訂,擁有廣闊的市場(chǎng)應(yīng)用前景。

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